簡要描述：UID轉錄組建庫試劑盒
省時 同時構建8個文庫僅5小時，時間節省30％
省力 無需第二鏈合成等步聚，操作簡便
省心 建庫起始量低至100ng
精確 測序結果與qPCR結果高度*

紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 ：1500 1904 520   Q:239 555 7778

UID轉錄組建庫試劑盒

• 省時  同時構建8個文庫僅5小時，時間節省30％
• 省力  無需第二鏈合成等步聚，操作簡便
• 省心  建庫起始量低至100ng
• 精確  測序結果與qPCR結果高度*

      轉錄組為特定細胞在某一功能狀態下轉錄出來的所有 RNA，主要包括mRNA，某些情況下也包括非編碼 RNA。轉錄組測序利用高通量測序技術，快速且全面地揭示某一物種特定細胞或組織在某一狀態下的幾乎所有轉錄本信息，包括轉錄本表達量、可變剪接體、可變 polyA 位點等。

      定量轉錄組測序（KC-DigitalRNA-seq），在文庫擴增之前為每一條 RNA 片段加上*的身份標簽（Unique Identifier，UID）。那么同一個片段擴增出來的產物均帶有相同的標簽，而天然重復片段則帶有不同的標簽。測序完成后利用 UID 過濾數據，將相同標記的擴增產物進行合并，就能準確去除 PCR 擴增重復、同時保留樣本的天然重復，一比一準確還原樣本擴增前的原始狀態。在此過程中，PCR 擴增和測序錯誤同樣可以被糾正：擴增和測序的錯誤會使得相同 UID 標簽對應多個不同的序列，那么只需比較這些序列的相似性，即可糾正這些錯誤。

測序結果對比

? KC-DigitalRNA 建庫方法 VS 基于 dUTP 鏈特異性的 RNA 建庫方法

     KC-DigitalRNA 建庫方法采用*的 splint ligation（單鏈加接頭）方法，省去了 cDNA 第二鏈的合成、修復和加 A 的步驟，建庫總時長縮短 1~2 小時。

測序數據分析

      raw data 進行質量控制后，測序數據（clean data）重復序列水平結果如下圖所示：

        不計算 UID *識別序列時，重復次數為 1 的 reads（unique reads）的比例約為 18%，計算 UID *識別序列時，unique reads 的比例提高到約 28%。在總 reads 中，PCR 擴增產生的重復 reads 約占 10%。通過對多個樣本的統計發現，在總 reads 中 PCR 擴增產生的重復 reads 約占 8%~11%。

KC-DigitalRNA 測序結果 VS 常規轉錄組測序結果

（1）常規轉錄組和 KC-DigitalRNA 測序篩選差異表達基因的結果

clean_up:常規轉錄組測序篩選獲得的差異上調基因
UID_filter_up: KC-DigitalRNA 測序 UID 過濾后篩選獲得的差異上調基因
clean_down:常規轉錄組測序篩選的差異下調基因
UID_filter_ down: KC-DigitalRNA 測序 UID 過濾后篩選獲得的差異下調基因

（2）常規轉錄組和 KC-DigitalRNA 測序結果通過 qPCR 驗證

     常規轉錄組測序與 qPCR 定量結果的相關系數 R2 為 0.859，KC-DigitalRNA 測序與 qPCR 定量結果的相關系數 R2 達到 0.985。

KC-DigitalRNA 建庫方法不同起始量建庫測序結果

    分別使用 100ng、500ng、1ug 作為建庫起始量，并將不同建庫起始量的測序結果進行相關性分析相，皮爾遜相關系數關系數 R2均在 0.97 以上。

A：unique reads比例提升。不計算UID標簽序列時，重復次數為1的reads（unique reads）的比例約為18%，計算UID標簽序列時，unique reads的比例提高到約28%。多個樣本統計顯示，在總reads中PCR擴增產生的重復約占8％－11％
B：與qPCR結果高度*，分別用UID轉錄組建庫測序和qPCR檢測表達倍數變化，兩種方法的結果相關性達到0.985

C：不同建庫起始量相關性高。分別使用1ug、500ng、100ng起始量進行建庫測序，不同起始量的結果皮爾遜相關系數R²均超過0.978

轉錄組建庫試劑盒產品信息

      貨號                                   名稱                                                                                            規格

DRO85－01        KC-Digital^TM Stranded mRNA-seq Library Prep Kit  for Illumina^{®          24 rxn}

DRO85－02        KC-Digital^TM Stranded mRNA-seq Library Prep Kit  for Illumina^{®                 96 rxn}  

DLRO87－01       KC-Digital^TM Total RNA-seq Library Prep Kit for Illumina^{®                            24rxn}  

DLRO87－02       KC-Digital^TM Total RNA-seq Library Prep Kit for Illumina^{®                            96 rxn} 

 紅榮微再（上海）生物工程技術有限公司 ：1500 1904 520   Q:239 555 7778

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