了解一下無血清細胞凍存液的操作步驟及注意事項吧

　　無血清細胞凍存液通用于各種動物細胞株(腫瘤細胞和常規(guī)細胞)，凍存細胞可在-80℃長期保存。配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。
 

　　該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分，提高細胞存活率和活力，亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。
 

　　下面讓我們來了解一下無血清細胞凍存液的操作步驟及注意事項吧。
 

　　操作步驟：
 

　　1.常規(guī)方法收集對數(shù)期的貼壁細胞或懸浮細胞于試管中。
 

　　2.根據(jù)培養(yǎng)細胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細胞數(shù)。
 

　　3.將所需數(shù)目的細胞懸浮液置于離心管中，1000rmp，5分鐘離心收集培養(yǎng)細胞沉淀，棄去離心管中的上清液。
 

　　4.加入適量的細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度約為5×105-1×107/ml。輕柔地混勻細胞，制成細胞混合液。
 

　　5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標記的凍存管中，建議每管1ml或1.5ml。
 

　　6.直接將分裝好的細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。
 

　　7.如果想液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天時間，方可移至液氮罐中保存。
 

　　凍存細胞復蘇步驟：
 

　　1.從冰箱中取出凍存的細胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
 

　　2.待凍存管中細胞混合液融化后，立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于冷凍管中與細胞混合，將其中的混合液移至含有約5ml該細胞培養(yǎng)基的離心管中，1000rmp，5分鐘離心收集凍存細胞沉淀，移去上清液(操作時小心，切勿將細胞沉淀移去)。
 

　　3.加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩加入到細胞沉淀，輕柔地混勻，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)容器中。
 

　　4.鏡檢細胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法經行細胞常規(guī)培養(yǎng)。
 

　　注意事項：
 

　　1.凍存細胞分裝后，應減少在外存放時間，盡快移入到-80℃超低溫冰箱。
 

　　2.對于干細胞(ES細胞)、原代細胞等凍存時，我們建議用戶在使用前，事先對所凍存的胞進行至少為期1周的該產品試驗性細胞冷凍保存培養(yǎng)，確認性能后再進行正式凍存。
 

　　3.本品含有10%DMSO，部分對DMSO敏感的細胞，建議對其進行至少1周的本產品試驗性的細胞凍存培養(yǎng)，確認性能后再正式凍存。
 

　　4.對于沒有保種的新的細胞類型，我們建議同時用含有血清的凍存液同時凍存，確保細胞凍存不出現(xiàn)意外全部死亡等現(xiàn)象發(fā)生。
 

　　5.細胞凍存液經過嚴格的內毒素、滲透壓、病原體和pH檢驗，確保產品不含病菌、病毒以及支原體等。用于常規(guī)的細胞凍存，-80℃可長期保存，細胞存活率在90-98%。