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    轉染試劑盒的標準操作步驟

    更新時間:2016-01-27瀏覽:2401次

       轉染試劑盒可用于轉染的細胞包括各種細胞株和原代細胞,例如成纖維細胞,成肌細胞,間充質干細胞,上皮細胞等等。轉染試劑盒都經無菌處理,并通過嚴格質量檢驗,可以直接使用。轉染試劑盒可在室溫(15~25℃)保存三個月,4℃保存一年,-20℃保存一年以上。

      轉染試劑盒的標準操作步驟:

      1. 使用前預熱試劑至常溫。

      2. 轉染前一天,接種適量細胞懸液至100-mm培養皿、60-mm培養皿或6孔板中,放置到潮濕37°C 5% CO2 培養箱培養過夜。

      3. 次日,吸去細胞培養液,加入新鮮培養液。

      4. 取兩根無菌1.5ml eppendorf管,分別記為A、B。按下表,根據培養皿不同而加入不同體積的試劑:

      5. 用移液管混勻B管中溶液并將B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中。用氣泡法混勻轉染混合物,這一步盡量在2分鐘內完成,室溫孵育30分鐘。

      6. 將混合物逐滴加入到細胞中,輕輕搖晃培養皿使混合物均勻分布在細胞表面。

      7. 放置到潮濕37°C、5%CO2培養箱中培養過夜。

      8. 次日早上用新鮮培養基更換細胞培養液,于37℃ 5%CO2培養箱中繼續培養24-48h。

      9. 檢驗轉染效率(如熒光觀察,蛋白質印跡等)。

      轉染試劑盒使用注意事項:

      轉染前以細胞融合度不超過80%為宜,接種密度因所采用的細胞系和細胞的倍增時間而有所不同。

      高純度的質粒是獲得高轉染效率的必要條件,要確保A260/A280大于1.8,并且電泳檢測抽提到的質粒90%以上都是超螺旋。

      轉染時,B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中,請勿混亂順序。

      溶液的pH值關系到轉染效率,盡量避免把轉染試劑盒的溶液長時間暴露在空氣中,以免被空氣中的二氧化碳酸化。

      轉染時由于質粒不同、細胞不同,*的質粒用量需自行摸索。

      想要了解更多關于轉染試劑盒的信息,咨詢!

     

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