核酸保存純化:Streck 采血管和QIAamp核酸純化試劑盒

對孕婦外周血中游離 DNA 進行高通量測序（Next Generation Sequencing, NGS)，并分析孕婦外周血中攜帶的胎兒的染色體突變異常風險，特別是染色體非整倍體變異的檢測，是近幾年出現(xiàn)的無創(chuàng)產(chǎn)前篩查（NIPT）新技術(shù)。

NIPT產(chǎn)品

基于孕婦游離DNA的胎兒染色體非整倍體檢測(高通量測序法）流程及產(chǎn)品

血液標本采集、運輸、保存

血漿游離DNA提取純化

血漿游離DNA基因文庫構(gòu)建

文庫產(chǎn)物純化

基因測序

血液標本采集、運輸、保存

Streck Cell-Free DNA BCT® 血漿游離DNA采血管

產(chǎn)品英文名稱：Streck Cell-Free DNA BCT® BLOOD COLLECTION TUBE

產(chǎn)品中文名稱：Streck BCT® 血漿游離DNA采血管

貨號：218962,230253

Streck 血漿游離DNA采血管是一種直接提取的全血收集管，用于收集、運輸和儲存血液樣本。Streck 血漿游離DNA采血管內(nèi)含防腐劑，它能穩(wěn)定有核血細胞，防止細胞基因組DNA的釋放，保護血漿游離循環(huán)DNA：cfDNA ctDNA和循環(huán)腫瘤細胞（CTC）。

230253是218962的升級版，是Streck公司新推將玻璃和塑料的*性能融合在一起的Fusion2^TM混合塑料管。

成份

Streck 218962包含抗凝劑K₃EDTA和細胞液體防腐劑。

材質(zhì)

Streck 218962管材是玻璃，Streck 230253管材是一種特制的混合塑料Fusion2，兼具玻璃的*優(yōu)點和塑料的安全性。

血漿游離DNA提取純化

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit 循環(huán)核酸純化試劑盒

貨號： 55114 品牌：Qiagen

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit (50)

For 50 preps: QIAamp Mini Columns, Tube Extenders (20 ml), QIAGEN Proteinase K, Carrier RNA, Buffers, VacConnectors, and Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml)

樣品處理量：5mL

洗脫體積：20-150μL

可以洗去PCR抑制物，如：二價陽離子和蛋白

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit核酸純化試劑

從人類血漿或血清中濃縮和純化游離DNA和RNA

濃縮的核酸，高上樣量，低洗脫體積

回收DNA和RNA碎片

無需有機提取或乙醇沉淀

*去除污染物和抑制劑

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit核酸純化試劑盒大大簡化了從血漿或血清中濃縮和純化游離DNA和RNA的過程。

性能

分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段和mRNA可對普通血液樣品進行特異性地腫瘤類型檢測。這些存在于血清或血漿中的游離核酸通常都是<1000 bp（DNA）或<1000 nt（RNA）的片段。此外，小至21 nt的miRNAs可作為某些癌癥和疾病狀態(tài)的生物標記。

經(jīng)純化和濃縮的游離DNA和RNA不含蛋白、核酸酶和其他雜質(zhì)，可即用于各種下游應用，包括：

PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR

用于基于血液樣品的癌癥生物標記的研究、驗證和檢測

病毒核酸檢測

原理

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit核酸純化試劑盒簡化了從血漿或血清中純化游離DNA和RNA的過程。核酸特異性結(jié)合到QIAamp Mini離心柱上，污染物流走。PCR抑制物，如：二價陽離子和蛋白，可通過三步有效的洗滌步驟被*去除，結(jié)合在離心柱上的純核酸可用水或試劑盒中的緩沖液洗脫。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid技術(shù)從人類血漿、血清或尿液中獲得游離的DNA和RNA。

應用

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit核酸純化試劑盒可從含低濃度DNA和RNA碎片的原始樣本（人血漿中常規(guī)游離DNA的濃度為1–100 ng/ml）中純化和濃縮游離的DNA、RNA、miRNA，包括病毒核酸。起始樣本體積至多5 ml。

適用樣本

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit核酸純化試劑盒可從以下樣本類型中純化和濃縮核酸：

人類血漿

血清

尿液

NIPT介紹

NIPT發(fā)展

NIPT發(fā)展迅速，而且它還不是標準醫(yī)療項目，只是一個選擇項目。

NIPT發(fā)展快速得異常，消費者在推進。可能原因：同步社交媒體發(fā)展，討論較多。

NIPT應用

NIPT在實際運用中要解決的問題：

市場壓力

專業(yè)指南的快速變化。高風險孕婦和一般孕婦做咨詢用的時間都不一樣。那么獲得的信息也不同。孕婦查出有問題不一定要終止妊娠，還可以多做應對準備。而且做繼續(xù)懷孕決定的比例達到了40%。

NIPS在產(chǎn)前檢測中的準確定位。一開始定位是高危產(chǎn)婦，之后不是高危產(chǎn)婦也對NIPT有興趣。中等風險妊娠群體的NIPT檢測，還會再上升。

NIPT的檢測

NIPT的檢測還不是準確。

低風險用戶越多，PPV值越低。

生物學原因?qū)е碌哪阁w的miccroduplications也會影響檢測結(jié)果。

NIPT和標準產(chǎn)前檢測項目的比較

標準產(chǎn)前檢測項目：血清生化檢測和nuchal translucency超聲波檢查。

NIPT在在某些檢測方面的錯誤率格外低，比如cfDNA陽性預測方面比標準項目做得好。

NIPT的可選項目:性染色體

常規(guī)染色體非整倍體異常項目：21- 三 體 綜 合 征（trisomy 21，T21）、18-三體綜合征（trisomy 18，T18）和 13-三體綜合征（trisomy 13，T13）。

檢測可選項目：性染色體等。NIPT能比超聲波更早知道是否有性別染色體異常。

NIPT技術(shù)

美國NIPS的四個公司：4種技術(shù)。檢測錯誤率差別較大。

Illumina：WGS 全基因組測序

Sequenom：WGS 全基因組測序

Ariosa Diagnostics：targeted approach on a microarray 微陣列靶向方法

Natera：targeted sequencing for SNP 靶向測序檢測單基因

參考文獻

1.染色體非整倍體無創(chuàng)產(chǎn)前檢測技術(shù)質(zhì)控要點及臨床應用進展.曲守方; 于婷; 孫楠; 李麗莉; 陳芳; 吳英松; 黃杰.分子診斷與治療雜志.

2.Cell-free DNA screening blooms in expansion to low-risk pregnancies,Anne Paxton,2017 Issues, ARTICLES, March 2017.

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