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    Rubicon WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒說明書

    更新時間:2017-11-06瀏覽:3507次

    A 產品組成—PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒

     

    組份

    蓋子顏色

    Cell Extraction Buffer

    細胞提取緩沖液

    綠色

    Extraction Enzyme Dilution Buffer 提取酶稀釋緩沖液

    紫色

    Cell Extraction Enzyme 細胞提取酶

    黃色

    Pre-Amp Buffer 預擴增緩沖液

    紅色

    Pre-Amp Enzyme 預擴增酶

    白色

    Amplification Buffer 擴增緩沖液

    桔色

    Amplification Enzyme 擴增酶

    藍色

    Nuclease-Free water 無核酸酶水

    無色

    User Manual 使用手冊

     

    試劑量可供50次反應。

     

    B PicoPLEX WGA Kit儲存與處理

    -20℃儲存。

    使用前,細胞提取酶、預擴增酶和擴增酶組份放到冰上。其他組份使用前在冰上解凍并且稍微漩渦振蕩(vortex and quick-spin)。

    試劑儲存、處理和反應設置都要遵守實驗室PCR操作規范。

     

    C單細胞全基因組擴增試劑盒其他準備材料

    熱循環儀(PCR儀,推薦使用實時PCR儀)

    PCR管或96孔PCR板

    低吸附吸頭(Low-binding barrier tips)

    磷酸鹽緩沖液(PBS)

     

    D PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒產品描述

    單管,3步,PicoPlEX WGA試劑盒專門用于人單細胞和pg級DNA的擴增,具有可重復性、低背景的特點。3小時內完成細胞裂解、熱循環文庫制備和低背景擴增,zui終能得到2-5µg擴增DNA。

     

     

    PicoPLEX單細胞全基因組擴增流程

    細胞+裂解/提取緩沖液,15min ——預擴增混合液,90min ——擴增混合液,30min ——分析

     

    PicoPLEX WGA Kit適用樣本

    1.1-10個人細胞,如:囊胚細胞、極體、滋胚層細胞、羊水細胞、循環腫瘤細胞、培養細胞等。

    2.1000-10000個細菌細胞

    3.分離DNA(15pg-50pg人DNA)

    4.分選染色體(Sorted Chromosomes )

    5.不完整或片段化,單/雙鏈DNA

    6.樣本zui大體積:5µL

     

    E PicoPLEX WGA全基因組擴增產物應用

    拷貝數變異(CNV)分析,基于oligonucleotide aCGH, BAC aCGH, or qPCR

    SNP 基因表型

    突變檢測

     

    F PicoPLEX單細胞全基因組擴增細胞樣本采集

    細胞采集方法

    兼容PicoPLEX WGA Kit的正確細胞采集方法有流式分選術,稀釋和顯微操作。細胞染色后可能會對試劑盒性能造成不好影響。為了得到*結果,一定要避免使用福爾馬林固定法。

    細胞洗滌

    細胞樣本制備時強烈推薦用PBS洗滌,以盡量減少非細胞DNA污染。選擇不含鎂、鈣、BSA的PBS。zui終細胞樣本中所含PBS體積不能超過2.5µL。

     

    G 使用擴增后的對照DNA作為參照

    DNA對照樣本對于某些如微陣列和qPCR平臺有參照價值。為了得到更準確的結果,強烈推薦PicoPLEX擴增樣本的對照選擇PicoPLEX擴增后的DNA對照而不是沒有擴增的DNA對照。

    DNA對照樣本按樣本配制方法(J)配制,按PicoPLEX操作步驟(K)擴增。Pooling DNA對照的擴增反應的產物可以得到*結果。

     

    H PicoPLEX WGA全基因組擴增產物純化和定量

    WGA單細胞全基因組擴增產物用于下游時,許多應用使用前需要純化和定量。純化方法可以使用 spin columns或過濾板。

    產物定量使用紫外吸光度法(UV absorbance 1 OD260 = 50 µg/mL)。PicoGreen™或其他雙鏈DNA定量法所得PicoPLEX產物密度可能不可靠。

    純化后的PicoPLEX擴增產物-20 °C儲存

     

    I 選擇合適的反應管/反應板

    PicoPLEX操作指南的步驟7中,如果孵育時PCR管/板密封性不夠,會造成大量(>5 µL)的試劑蒸發,zui終影響PicoPLEX WGA結果的穩定性和重復性。

    步驟7也可以加15 µL 水,無視所選反應管/板密封性能否盡量減少蒸發造成的體積損失。(A mock PicoPLEX Protocol Step 6 incubation using 15 µL of water is advised to confirm whether a selected tube or plate/seal combination can be used with minimal volume loss due to evaporation.)

     

    J樣本配制方法

    5µL細胞樣本

    1.依照F所述方法用PBS稀釋或淋洗細胞。

    2.如果采用流式分選采集細胞:

    單個細胞加入含5 µL細胞提取緩沖液(綠蓋)的PCR管/孔。

    如果采用顯微操作或稀釋法

    單個細胞先用zui少PBS(<2.5 µL))混合,再加入含適量細胞提取緩沖液(綠蓋)的PCR管/孔,zui終樣本體積5 µL。

    1. 配制好的細胞立即 -80 °C 凍存或直接進行擴增操作。

     

    5µL DNA樣品(單細胞simulation)

    1.配制1 ng/µL 純化DNA溶液:PCR管/孔中,5 mM Tris-HCl (pH8.0)稀釋對照DNA。

    2.漩渦振蕩30s。

    3.配制15 pg/µL DNA溶液:3µL 1 ng/µL DNA溶液+197 µL 5 mM Tris-HCl (pH 8.0)。

    4.漩渦振蕩30s。

    5.PCR管/孔中,1 µL 15 pg/µL DNA溶液+ 4 µL 細胞提取緩沖液(綠蓋)。

     

    K PicoPLEX操作步驟

    細胞提取

    1.添加提取混合液各組份并充分混勻。

    Extraction Cocktail Component

    提取混合液組份

    蓋子顏色

    Extraction Enzyme Dilution Buffer 提取酶稀釋緩沖液

    紫色

    Cell Extraction Enzyme細胞提取酶

    黃色

     

    2.每5µL細胞樣本或DNA樣本(J部分配制)加5 µL新鮮配制的提取混合液。

    3.按下表在熱循環儀中孵育樣本:

    1 cycle

    75 °C

    10 min

    1 cycle

    95 °C

     4 min

    1 cycle

    室溫

    Hold

     

    4.試管/板稍微離心。

     

    預擴增

    5.添加預擴增混合液各組份并充分混勻。

    Pre-Amp Cocktail Component 

    預擴增混合液各組份

    蓋子顏色

    Pre-Amp Buffer 預擴增緩沖液

    紅色

    Pre-Amp Enzyme 預擴增酶

    白色

     

    6.每個細胞樣本/DNA樣本加5µL預擴增混合液。

    7.按下表在熱循環儀中孵育樣本:

    1 cycle

    95°C

    2 min

    12 cycles

    95°C

    15 s

    15°C

    50 s

    25°C

    40 s

    35°C

    30 s

    65°C

    40 s

    75°C

    40 s

    1 cycle

    4°C

    Hold

     

    8.稍微離心,預擴增孵育產物放到冰上。

    擴增

    9.添加擴增混合液各組份并充分混勻。

     

    Amplification Cocktail Component

    擴增混合液組份

    蓋子顏色

    Amplification Buffer 擴增緩沖液

    桔色

    Amplification Enzyme 擴增酶

    藍色

    Nuclease-Free Water 無核酸酶水

    透明

     

    注意:樣本擴增效率可以通過在擴增混合液中添加SYBR Green I dye(zui終密度:0.125x)進行實時PCR儀分析。一些儀器需要額外添加其他染色劑做信號歸一化(signal normalization)。

    10. 新鮮配制的擴增混合液取60 µL和15 µL預擴增孵育產物混合,吸管混勻。

    11.按下表在熱循環儀中擴增樣本:

     

    1 cycle

    95 °C

    2 min

    14 cycles

    95°C

    15 s

    65°C

    1 min

    75°C

    1 min

    1 cycle

    4°C

    hold

     

    注意:基于Rubicon用流式分選培養細胞的測試,推薦14 cycles。一些細胞類型要獲得zui高產量,可能需要更多cycles(zui高達16 cycles)。

    12.PicoPLEX 擴增產物立即 -20 °C儲存或用于下游純化(見H)。

     

    RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒說明書由華雅再生醫學旗艦公司:紅榮微再翻譯。

     

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    RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒

    從單細胞中擴增DNA構建高重復性的文庫現在成為可能PicoPLEX WGA kit采用技術,設計、優化用于從單細胞中擴增單拷貝基因組DNA起始量低至單細胞或6pg基因組DNA。便捷的單管操作流程減少失誤,節省時間并降低反應背景

    PicoPLEX WGA Kit兼容微陣列比較基因組雜交(array CGH)分析及PCR平臺,試管嬰兒行業供應商如BlueGnome信賴并用于PGS/PGD


    產品訂購信息

    貨號

    產品名稱

    包裝

    RB3050/R30050

     PicoPLEX WGA Kit單細胞全基因組擴增試劑盒,array CGH、PCR分析用

    50次反應

    RB3381/R300381

    PicoPLEX DNA-seq Kit,48種雙端illumina引物

    48

     

     

    選購RB3050 Rubicon PicoPLEX WGA Kit 單細胞全基因組擴增試劑盒產品歡迎您致電 華雅再生醫學旗艦公司:紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司 :152 1681 4001。華雅再生醫學-客服: 316 808 6348。

    紅榮微再(上海)生物工程技術有限公司以“傳遞科學價值,服務科學研究”為宗旨,主營:干細胞、醫療、細胞治療、器官再生 四大板塊的產品。

     

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