支原體檢測試劑盒的作用及實驗過程

 　　支原體檢測試劑盒是用于在培養細胞中原位染色檢測支原體或其它原核生物的試劑盒。主要用于檢測培養細胞中是否存在支原體污染。

　　培養細胞中的細菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學顯微鏡下可見，但支原體污染在光學顯微鏡下不可見，必須通過特定的檢測方法進行檢測。檢測支原體污染的方法有很多種，包括支原體分離培養、支原體特異酶檢測、RT-PCR檢測以及DNA熒光染色檢測。上述檢測方法中，除DNA熒光染色檢測外操作步驟相對比較煩瑣并且所需時間較長。本支原體檢測試劑盒是通過Hoechst染色來檢測支原體的。支原體檢測試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測支原體污染。

　　細胞培養體系被支原體污染之后，支原體*的代謝酶類會產生支原體*的代謝產物，而真核細胞或細菌不會產生這種代謝產物，因而可以通過檢測這種代謝產物而檢測支原體的存在。如果樣品中含有支原體特異的代謝產物，反應系統(包括樣品、反應孔與反應緩沖液)會產生藍綠色，代謝產物濃度越高，顏色越深。

　　支原體檢測試劑盒儲存條件

　　該試劑盒已滅菌封裝。4-25℃儲存，可達12個月。

　　支原體檢測試劑盒的實驗方法

　　1. 所有操作均在室溫(22-28℃)下進行。

　　2. 打開檢測板，在孔中加入40 μL Reaction Buffe A。

　　3. *個孔加入10 μL陰性對照，其他孔加入10 μL待測樣品或陽性對照。

　　4. 輕輕混勻，室溫孵育5分鐘。

　　5. 所有孔中均加入40 μL Reaction Buffe B。

　　6. 輕輕混勻，室溫孵育4分鐘。

　　7. 每孔加入5μL Stop Solution，輕輕混勻。

　　8. 可在30分鐘內觀察樣品顏色的變化或進行拍照保存：

　　a) 如果待測樣品的顏色深于陰性對照，表明樣品被支原體污染。

　　b) 如果待測樣品的顏色與陰性對照相同，表明樣品沒有支原體污染。

　　如果發現有支原體污染，建議更換無污染的細胞進行培養。如果有必要去除支原體，可以使用Mycoplasma Removal Agent、cyprofloxacin或BM-Cyclin去除支原體污染。支原體檢測試劑盒如用于六孔板樣品檢測，至少可以檢測100個樣品。